ABI7500荧光定量PCR仪已经成为分子生物学、医学、食品工业、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域广泛应用的一种实验室仪器。ABI7500荧光定量PCR仪在操作中常会遇到哪些问题呢?该如何来解决呢?
PCR在产物序列中引入了错误,这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多,这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶,同时降低循环数。此外,四种dNTP的浓度不同也会出现该问题,此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。
ABI7500荧光定量PCR仪目的条带很亮,但是边沿不清楚,前后有拖尾现象。出现这样的问题,则需要进行细致的分析,因为引起该问题的可能很多。可先检查是否模板质量问题,如有降解等,模板应避免反复冻融。也有可能是抽提RNA时有污染,则需要重新抽提RNA。此外,也可能是非特异性扩增引发该问题,可提高退火温度,少循环次数。电泳缓冲液时间太长,ph值和盐离子浓度明显改变、电泳时电压太高、电泳液过久没换,电泳胶脏了等都可能引发该问题。如果不是由上述原因引起,则进一步检查加样量是否过大,制胶过程中胶孔是否制好,EB是否冲洗干净、模板中是否混有基因组DNA或蛋白等。也需考虑是否扩增的条件不合适。针对具体原因再采取相应的措施。
- 热循环系统:珀耳帖效应系统
- 加热块规格:96孔加热块
- 选耗材:96孔反应板与光学盖膜/96孔反应板与光学平盖/0.1mL 8连管与光学平盖
- 支持容量:10-30μL
- 样本升降温速率:快速模式:±3.5℃/秒
- 标准模式:±1.6℃/秒
- 9600模式:-1.6-+0.8℃/秒
- 加热块极限升降温速率:5.5℃/秒
- 温度范围:4℃-100℃
- 温度精度:设置值/显示温度的±0.25℃(35℃至95℃)(时钟启动后3分钟开始测量)
- 温度均一性:±0.5℃(35℃至95℃)(时钟启动后30秒开始测量)
- 光学系统:五色激发光滤光片,五色发射光滤光片和CCD成像系统
- 安装时已校准染料:SYBR Green I, FAM , VIC , JOE , NED , TAMRA , ROX ,Texas Red, Cy3 , Cy5
- 被动参照染料:ROX
- 数据采集:对所有反应孔收集的所有五色滤片的数据(无论何种反应板设置),试验结束后反应板设置可修改。
- 定量PCR运行时间:快速模式不超过2小时
- 快速模式不超过40分钟
- 软件:应用软件(基于标准曲线的L定量、相对标准曲线、基于比较Ct值的相对定量、融解曲线分析、存在/不存在、基于或非基于实时扩增的基因分型)
- 引物分析软件(用于客户自行设计引物和探针)
- 尺寸(宽×深×高):34×45×49cm
- 重量:34kg